|
|||
|
2019, Cilt 49, Sayı 3, Sayfa(lar) 162-168 |
[ İngilizce Özet ] [ PDF ] [ Benzer Makaleler ] |
Cryptosporidium spp.nin Realtime PCR Yöntemi ile Saptanması İçin Metot Verifikasyon Çalışması |
Selma Usluca1, Asiye Evren Eken Berberoğlu1, Bekir Çelebi2, Selçuk Kılıç1 |
1Halk Sağlığı Genel Müdürlüğü, Mikrobiyoloji Referans Laboratuvarları ve Biyolojik Ürünler Daire Başkanlığı, Ankara 2Halk Sağlığı Genel Müdürlüğü, Zoonotik ve Vektörel Hastalıklar Daire Başkanlığı, Ankara |
Anahtar Sözcükler: Cryptosporidium spp., realtime PCR, metod verifikasyon |
Amaç: Cryptosporidium spp. özellikle gıda ve su kaynaklı ishal nedenleri arasında
önemli bir parazittir. Bu çalışmada, dışkı örneklerinde Cryptosporidium spp.nin rutin
tanısında kullanılan moleküler yöntemin metod verifikasyonunun yapılması amaçlanmıştır.
Yöntem: Bu amaçla Cryptosporidium parvum pozitif buzağı dışkı örneği PBS ile dilüe edilmiş ve Cryptosporidium/Giardia direkt floresan antikor kiti kullanılarak ookist sayımı yapılmıştır. Aynı örneğe ticari kit ile DNA ekstraksiyonu uygulanmıştır. Elde edilen DNA örneği kullanılarak Cryptosporidium spp., Giardia intestinalis, Entamoeba histolytica, Dientamoeba fragilisin moleküler yöntemlerle saptanması için multipleks PCR kiti kullanılarak PCR amplifikasyonu gerçekleştirilmiştir. Bulgular: PCRın saptama limiti 8 ookist/reaksiyon olarak belirlenmiştir. Daha sonra yüksek ve düşük pozitif örnekler hazırlanmış, iki farklı analist ile doğruluk ve kesinlik çalışmaları yapılarak testin metot verifikasyonu tamamlanmıştır. Sonuç: Metod verifikasyon çalışmalarının varyasyon katsayıları %15in altında olduğu için testin, rutin hasta örneklerinde Cryptosporidiumun araştırılmasına uygun olduğuna karar verilmiştir. |
[ İngilizce Özet ] [ PDF ] [ Benzer Makaleler ] |
|