Bağışıklık yetersizliği olan hastalarda, özellikle lösemi, lenfoma ve transplantasyon hasta gruplarında, mantar infeksiyonlarının yüksek oranda morbidite ve mortaliteye yol açtıkları bilinmektedir. Kan kültürü ve seroloji gibi klasik tanı testleri, mantar infeksiyonlarının erken tanısı için yeterince duyarlı ve özgül değildir. Bu nedenle son yıllarda, daha duyarlı ve özgül moleküler biyoloji yöntemleri kullanıma girmiştir. Bu çalışmada, bağışıklık yetersizliği olan hasta gruplarından alınan 120 EDTA'lı kan örneği ile çalışılmış; hastalardan alınan kan örneklerinden, DNAzol yöntemi ve ticari DNA ekstraksiyon kiti (Qiagen) kullanılarak, DNA izole edilmiştir. Daha sonra polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) uygulanan örnekler, %2'lik agaroz jelde yürütülmüş ve pozitif örneklerin jelde mantar türlerine özgü ürünlerin verdiği 500 bp'lik tek bandı verdikleri saptanmıştır. Örneklerin sekans analizi için öncelikle Qiagen purifikasyon kiti kullanılarak, miktarları saptanan PCR ürünlerinin beş katı oranda alkol serileri ile muamele edilerek, özel filtreleri bulunan kolonlardan süzülen DNA'lar saflaştırılmıştır. PCR ürünleri Qiagen Dye Ex kiti kullanılarak işaretlenmiştir. Sekans analizleri ABI Prism 377 (Perkin Elmer) aletiyle yapılmıştır. BLAST programı kullanılarak sekans analizleri değerlendirilmiş ve pozitif olarak değerlendirdiğimiz örneklerin, mantar türlerine özgü gen dizileri taşıdıkları saptanmıştır. Yüzyirmi kan örneğinde uygulanan iki farklı ekstraksiyon tekniği sonuçları karşılaştırıldığında, DNA izolasyonunda Qiagen ekstraksiyon tekniğinin daha iyi sonuç verdiği belirlenmiştir. Qiagen kitiyle bulunan 20 pozitif örneğin, DNAzol tekniği kullanıldığında yalnızca 5'inde pozitiflik saptanmıştır. Bu da bize infeksiyon etkenlerinin tanısı amacıyla kullanılan ekstraksiyon teknikleri seçilirken, maliyet uygunluğu yanısıra duyarlılık ve özgüllüğü daha yüksek olan yöntemlerin seçilmesi gerektiğini göstermektedir. Örneklere yapılan ekstraksiyon (Qiagen) ve PCR'ı takiben, 20 pozitif örnek bulunmuştur. Pozitifliklerin %35'inin Aspergillus niger, %60'ının Aspergillus fumigatus ve %5'inin mikst infeksiyon (A.niger/A.fumigatus) olduğu saptanmıştır. Son yıllarda özellikle araştırmalarda PCR ürünlerinin gerçekte aranılan suş olup olmadığının saptanmasında, sekans analizlerinin yapılarak doğrulanması gerektiği vurgulanmaktadır. Çalışmada öncelikle mantar infeksiyonu tanısı amacıyla DNA izolasyonunda uygulanan ekstraksiyon tekniklerinden ikisini karşılaştırarak, en uygun teknik olarak; DNAzol tekniğine göre maliyeti yüksek fakat PCR sonuçları daha iyi olan Qiagen tekniği ekstraksiyonda kullanılmıştır. PCR sonuçlarında mantarlara spesifik kullandığımız 18S rRNA gen dizilerini taşıyan primerlere özgü ürünlerin, agaroz jelde 500 bp'lik tek band verdiği saptanmış ve pozitif olarak değerlendirilmiştir. Pozitif örneklerin, sekans analizleri de değerlendirildiğinde A.fumigatus, A.niger, türlerine ait gen dizileri taşıdıkları saptanmıştır.